BPGM Double Nickase Plasmid (h): sc-405810-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BPGM Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BPGM Double-Nickase-Plasmid (h) und BPGM Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BPGM abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: BPGM: sc-373819
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BPGM Double Nickase Plasmid (h) | sc-405810-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BPGM Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405810-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die Bisphosphoglycerat-Mutase (BPGM) ist ein in erythroiden Zellen angereichertes Enzym, das den Rapoport–Luebering-Shunt reguliert, indem es 2,3‑Bisphosphoglycerat (2,3‑BPG) synthetisiert und abbaut – einen zentralen allosterischen Effektor der Sauerstoffaffinität von Hämoglobin. Durch die Kontrolle der 2,3‑BPG-Spiegel verknüpft BPGM den glykolytischen Fluss mit der Sauerstoffabgabe und der metabolischen Homöostase der roten Blutkörperchen und beeinflusst damit die Energiebilanz sowie redoxsensitive Prozesse in reifen Erythrozyten. Eine veränderte BPGM-Aktivität stört die 2,3‑BPG-Menge und kann die Sauerstoffdissoziationsdynamik verschieben, wodurch BPGM ein relevantes Ziel in Studien zur Erythrozytenphysiologie und zur Anpassung an Hypoxie ist. Eine genetische oder metabolische Fehlregulation dieses Signalwegs wird im Zusammenhang mit vererbten Erythrozytenerkrankungen und anämieassoziierten Phänotypen untersucht, bei denen Sauerstofftransport und glykolytisches Remodeling beeinträchtigt sind.
BPGM Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BPGM-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BPGM abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BPGM-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BPGM-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.