Plásmido CRISPR de Activación (h) BMP-9: sc-402887-ACT

GDF2 codifica la proteína morfogenética ósea 9 (BMP-9), un ligando secretado de la superfamilia TGF-β que señaliza principalmente a través de receptores de tipo I como ALK1 y receptores de tipo II, incluido BMPR2, para activar la transcripción dependiente de SMAD1/5/9. En células humanas, BMP-9 ayuda a regular la quiescencia endotelial, la remodelación vascular y el equilibrio angiogénico, y también influye en programas génicos osteogénicos y metabólicos de manera dependiente del contexto. La actividad de la vía de BMP-9 se entrecruza con la comunicación cruzada BMP/TGF-β, la regulación de la matriz extracelular y la señalización inflamatoria, modulando decisiones de destino celular en compartimentos vasculares, hepáticos y mesenquimales. En la literatura, la señalización BMP-9/GDF2 desregulada se ha asociado con la patobiología vascular, incluidos trastornos hereditarios y adquiridos de la función endotelial y de la remodelación, lo que respalda su relevancia como diana de investigación en biología cardiovascular y del desarrollo.

BMP-9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GDF2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BMP-9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GDF2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GDF2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BMP-9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GDF2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BMP-9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BMP-9 en células tumorales con expresión de GDF2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.