Plasmide CRISPR d'Activation (h) BMP-8B: sc-404893-ACT

Le gène humain **BMP8B** code la protéine morphogénétique osseuse 8B (BMP-8B), un ligand sécrété de la superfamille TGF-β qui signale via les récepteurs BMP de type I/II à activité sérine/thréonine kinase afin d’activer des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD1/5/8. BMP-8B contribue à la régulation des décisions de destinée cellulaire, notamment la différenciation ostéogénique et adipogénique, la mise en place des patrons de développement et le remodelage tissulaire, grâce à un contrôle coordonné de la prolifération et de la dynamique de la matrice extracellulaire. Au sein des réseaux de la voie BMP/TGF-β, l’activité de BMP8B peut moduler le dialogue avec les voies MAPK et WNT, façonnant des sorties transcriptionnelles spécifiques au contexte. Des altérations de la signalisation BMP et une dérégulation de BMP8B ont été impliquées dans des troubles de la biologie squelettique, de la physiologie reproductive et de la régulation métabolique, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour des études centrées sur les voies de signalisation.

BMP-8B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BMP8B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BMP-8B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BMP8B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BMP8B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BMP-8B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BMP8B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BMP-8B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BMP-8B dans les cellules tumorales présentant une expression de BMP8B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.