BMP-7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419346

Panoramica

Bmp7 codifica la proteina morfogenetica dell’osso 7 (BMP-7), un ligando secreto della superfamiglia TGF-β che segnala attraverso i recettori BMP di tipo I/II per attivare SMAD1/5/9 e coordinare programmi trascrizionali che controllano la morfogenesi e l’omeostasi tissutale. Durante lo sviluppo del topo, BMP-7 contribuisce all’organogenesi e al patterning, con ruoli rilevanti nella formazione di rene, occhio e scheletro, e modula inoltre le interazioni epitelio–mesenchimali e il rimodellamento della matrice extracellulare. La segnalazione dipendente da BMP-7 interseca le vie MAPK e altre vie dipendenti dal contesto per regolare decisioni di destino cellulare, proliferazione e differenziamento. Un’attività di BMP-7 deregolata è associata a fenotipi di sviluppo anomali e a risposte fibrotiche e infiammatorie alterate, rendendo Bmp7 un bersaglio comune per studi meccanicistici in modelli rilevanti per la patologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BMP-7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Bmp7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Bmp7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Bmp7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BMP-7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Bmp7 per lo studio della segnalazione di BMP-7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Bmp7 critici per la funzione di BMP-7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Bmp7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BMP-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BMP-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Bmp7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BMP-7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BMP-7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Bmp7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Bmp7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.