BLCAM Double Nickase Plasmid (h): sc-401451-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD22 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD22 Double-Nickase-Plasmid (h) und CD22 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CD22 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD22: sc-271579
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BLCAM Double Nickase Plasmid (h) | sc-401451-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD22 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401451-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes CD22, auch als BLCAM bekannt, ist ein auf B‑Zellen beschränktes, sialinsäurebindendes Lektin der immunglobulinähnlichen (Siglec-)Familie, das als inhibitorischer Korezeptor des B‑Zell-Antigenrezeptors (BCR) fungiert. Nach Bindung/Aktivierung des BCR wird CD22 phosphoryliert und rekrutiert die Phosphatase SHP‑1, wodurch nachgeschaltete Kinase-Signale abgeschwächt und Calciumfluss, MAPK-Aktivierung sowie PI3K-gekoppelte Signalwege moduliert werden, die die B‑Zell-Aktivierung und -Toleranz prägen. Über seine Rolle bei der Kontrolle von Signalschwellen und der Förderung der Immunhomöostase trägt CD22 zur Regulation der Antigenantwort, von Überlebenssignalen und zur Aufrechterhaltung der peripheren B‑Zell-Selbsttoleranz bei. Eine fehlregulierte CD22-Signalübertragung oder -Expression wurde mit aberranten B‑Zell-Aktivierungszuständen in Verbindung gebracht, die für Autoimmunität und die Biologie B‑zellabgeleiteter Malignome relevant sind, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zur Kontrolle des BCR-Signalwegs unterstützt.
CD22 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CD22-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CD22 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CD22-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CD22-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.