Plásmido CRISPR de Activación (h) Bim_EL: sc-400515-ACT

BCL2L11 codifica Bim, un miembro proapoptótico de la familia BCL-2 que contiene únicamente el dominio BH3 y que conecta las señales de estrés celular con la permeabilización de la membrana externa mitocondrial y la activación de caspasas. La isoforma Bim_EL es una de las principales formas reguladas por fosforilación e integra señales de las vías MAPK/ERK, JNK y PI3K/AKT para ajustar la apoptosis, la anoikis y la homeostasis de las células inmunitarias. Mediante el antagonismo de proteínas BCL-2 antiapoptóticas y la activación de BAX/BAK, Bim ayuda a determinar el destino celular ante la retirada de factores de crecimiento, el estrés del retículo endoplásmico y las alteraciones del citoesqueleto. La desregulación de la expresión de BCL2L11 o de su control de señalización se ha implicado en la supervivencia de células cancerosas, en mecanismos de resistencia a terapias y en patobiología relacionada con el sistema inmunitario, lo que lo convierte en un nodo clave para la investigación de la apoptosis y las respuestas al estrés.

BimEL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BCL2L11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BimEL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BCL2L11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BCL2L11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BimEL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BCL2L11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BimEL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BimEL en células tumorales con expresión de BCL2L11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.