Plásmido Doble Nickase (m2) Bim: sc-419332-NIC-2

El gen murino Bcl2l11 codifica la proteína Bim, miembro de la familia Bcl-2 con dominio BH3 (BH3-only), un potente regulador proapoptótico que promueve la permeabilización de la membrana externa mitocondrial al antagonizar las proteínas antiapoptóticas de la familia Bcl-2 y activar Bax/Bak. Bim integra señales derivadas de la retirada de citocinas, del estrés oxidativo y del retículo endoplásmico (RE), y de vías de factores de crecimiento como PI3K–AKT y MAPK/ERK, configurando así la apoptosis intrínseca, la homeostasis de las células inmunitarias y la tolerancia mediante la eliminación de linfocitos autorreactivos. La actividad desregulada de Bcl2l11/Bim se ha vinculado en modelos preclínicos con una supervivencia alterada de linfocitos, autoinmunidad y la persistencia de células tumorales, lo que lo convierte en un nodo clave en las redes de respuesta al estrés y de toma de decisiones sobre el destino celular. La edición génica de Bcl2l11 en ratón respalda estudios mecanísticos de la señalización apoptótica, de fenotipos hematopoyéticos e inmunitarios y de dependencias específicas del contexto en modelos de investigación de cáncer y enfermedades inflamatorias.

Bim El plásmido de doble nicasa (m2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Bcl2l11 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Bcl2l11. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Bcl2l11. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Bcl2l11 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.