Bim Plasmídeo duplo de Nickase (m2): sc-419332-NIC-2

O gene Bcl2l11 de camundongo codifica Bim, uma proteína da família Bcl-2 do tipo “BH3-only”, um potente regulador pró-apoptótico que promove a permeabilização da membrana externa mitocondrial ao antagonizar proteínas antiapoptóticas da família Bcl-2 e ao ativar Bax/Bak. Bim integra sinais de privação de citocinas, estresse oxidativo e do retículo endoplasmático, bem como vias de fatores de crescimento, incluindo PI3K–AKT e MAPK/ERK, moldando assim a apoptose intrínseca, a homeostase de células imunes e a tolerância por meio da eliminação de linfócitos autorreativos. A atividade desregulada de Bcl2l11/Bim tem sido associada a alterações na sobrevivência de linfócitos, autoimunidade e persistência de células tumorais em modelos pré-clínicos, tornando-o um nó-chave em redes de resposta ao estresse e de decisão de destino celular. A edição gênica de Bcl2l11 em camundongos apoia estudos mecanísticos da sinalização de apoptose, de fenótipos hematopoéticos e imunológicos, e de dependências específicas de contexto em modelos de pesquisa de câncer e doenças inflamatórias.

Bim O Plasmídeo de Nickase Dupla (m2) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Bcl2l11 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Bcl2l11. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Bcl2l11. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Bcl2l11 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.