Plasmide CRISPR d'Activation (h) Biglycan: sc-401408-ACT

BGN code la biglycane, un petit protéoglycane sécrété riche en leucines, qui se lie aux collagènes et régule l’assemblage de la matrice extracellulaire (MEC), la mécanique tissulaire et la signalisation péricellulaire dans les tissus conjonctifs. La biglycane module la disponibilité des facteurs de croissance et la signalisation des récepteurs, en interagissant avec des voies telles que TGF-β/SMAD, Wnt/β-caténine et l’adhésion médiée par les intégrines, influençant ainsi la prolifération et la migration cellulaires ainsi que les réponses inflammatoires. En biologie humaine, une expression altérée de BGN et le remodelage de la MEC sont fréquemment associés à des processus fibreux, aux interactions tumeur–stroma, ainsi qu’à des pathophysiologies vasculaires et musculo-squelettiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la signalisation pilotée par la matrice. Ses rôles dans l’activation de l’immunité innée et la régulation des cytokines soutiennent également des investigations mécanistiques du remodelage tissulaire lié à l’inflammation.

Biglycan Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BGN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Biglycan Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BGN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BGN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Biglycan. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BGN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Biglycan au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Biglycan dans les cellules tumorales présentant une expression de BGN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.