betaKlotho CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401614

概要

KLBはβKlotho（ベータ・クロトー）をコードしており、これは単回膜貫通型の共受容体です。βKlothoはFGFRとの複合体形成を介して、内分泌性線維芽細胞増殖因子（FGF）に対するリガンド特異性を付与し、特にFGF19およびFGF21で顕著にその役割を果たします。肝臓や脂肪組織などのヒト組織では、βKlotho依存的なシグナル伝達がMAPK/ERK経路の活性化や、胆汁酸恒常性、脂質利用、糖代謝、エネルギーバランスを制御する転写プログラムを調節します。KLB発現の変化やβKlotho機能の異常は、肥満関連表現型、インスリン抵抗性、非アルコール性脂肪性肝疾患などを含む代謝調節異常と関連し得るほか、代謝活性の高い細胞におけるストレス応答や炎症性シグナル伝達を修飾することもあります。これらの特性により、KLBは内分泌性FGF経路および組織特異的な代謝クロストークを解析する上で有用な結節点となります。

betaKlotho CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKLB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KLB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KLBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、betaKlothoタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、betaKlothoシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KLB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• betaKlothoの機能に不可欠なKLBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KLBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• betaKlotho CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびbetaKlotho CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KLB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  betaKlotho HDRプラスミド（h）および betaKlotho HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKLBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKLB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。