beta Actin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418965

概要

Actbは、細胞の形態・極性・機械的安定性を支えるためにマイクロフィラメントへと重合する、進化的に高度に保存された細胞骨格タンパク質であるマウスβアクチンをコードします。βアクチンの動態は、RhoファミリーGTPアーゼやアクチン結合タンパク質が関与する経路において、アクチンの核形成・分岐・ターンオーバーが協調的に制御されることで、細胞質分裂、小胞輸送、細胞移動などの中核的プロセスを駆動します。構造的役割にとどまらず、アクチンの再編成は、メカノトランスダクションや核内アクチンプールを調節することで、転写プログラムやシグナル伝達にも影響します。アクチン構造の破綻は、発生異常、創傷治癒不全、免疫細胞の運動性変化、腫瘍細胞の浸潤といった実験モデルで広く関与が示されており、Actbは細胞生物学および疾患機序研究における重要な参照遺伝子座となっています。

beta Actin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるActb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Actb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Actbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、beta Actinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、beta Actinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Actb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• beta Actinの機能に不可欠なActbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Actbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• beta Actin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびbeta Actin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Actb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  beta Actin HDRプラスミド（m）および beta Actin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはActbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のActb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。