Partículas Lentivirales de Activación (m) beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3: sc-419239-LAC

Atp1b3 codifica la subunidad β3 de la Na⁺/K⁺-ATPasa, un complejo enzimático esencial de la membrana plasmática que mantiene los gradientes electroquímicos de Na⁺ y K⁺ necesarios para el potencial de membrana, la homeostasis osmótica y el transporte activo secundario. Al sustentar procesos dependientes de iones, ATP1B3 influye en la excitabilidad celular, la captación de nutrientes, la regulación del volumen y las vías de señalización vinculadas a la polaridad epitelial y la activación de células inmunitarias. Las alteraciones en la composición o la expresión de las subunidades de la Na⁺/K⁺-ATPasa se han asociado con disfunción de la barrera, señalización inflamatoria aberrante y respuestas al estrés relevantes para la biología de enfermedades cardiovasculares, neurológicas y metabólicas. En modelos murinos, la modulación de la expresión de Atp1b3 puede ayudar a dilucidar cómo la maquinaria de transporte iónico coordina la fisiología tisular y las respuestas a lesión o inflamación.

Las partículas de activación lentiviral beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Atp1b3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Atp1b3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Atp1b3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.