Bcl-6 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-400265-ACT-2

ヒトBCL6はBcl-6転写抑制因子をコードしており、BTB/POZドメインをもつジンクフィンガータンパク質として、コリプレッサー複合体（例：SMRT/NCoR、BCOR）をリクルートして標的遺伝子をサイレンシングすることで、胚中心B細胞の分化・増殖・生存を制御する。Bcl-6はB細胞受容体やサイトカイン経路からのシグナルを統合し、DNA損傷応答、アポトーシス、細胞周期チェックポイントを司るプログラムを調節することで抗体親和性成熟を形作る。BCL6の発現や活性の破綻は、胚中心由来のリンパ系悪性腫瘍や免疫制御の変調と強く関連しており、腫瘍性転写ネットワーク研究における重要な結節点となっている。BCL6の遺伝子編集は、転写回路の解明、エンハンサー—プロモーター依存性のマッピング、ならびに免疫・がんのモデル系における制御変異の機能的帰結の評価に広く用いられている。

Bcl-6 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BCL6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Bcl-6 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における BCL6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBCL6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Bcl-6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBCL6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBcl-6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBCL6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBcl-6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。