Plasmide CRISPR d'Activation (h2) Bcl-6: sc-400265-ACT-2

Le gène humain BCL6 code le répresseur transcriptionnel Bcl-6, une protéine à doigts de zinc BTB/POZ qui régule la différenciation, la prolifération et la survie des lymphocytes B du centre germinatif en recrutant des complexes corépresseurs (p. ex. SMRT/NCoR, BCOR) afin de réduire au silence les gènes cibles. Bcl-6 intègre des signaux issus du récepteur des cellules B et des voies des cytokines pour moduler des programmes contrôlant les réponses aux dommages de l’ADN, l’apoptose et les points de contrôle du cycle cellulaire, contribuant ainsi à façonner la maturation d’affinité des anticorps. Une expression ou une activité dérégulée de BCL6 est fortement associée aux cancers lymphoïdes dérivés du centre germinatif et à une régulation immunitaire altérée, ce qui en fait un nœud clé dans l’étude des réseaux transcriptionnels oncogéniques. L’édition génétique de BCL6 est largement utilisée pour disséquer les circuits transcriptionnels, cartographier les dépendances entre enhancers et promoteurs et évaluer les conséquences fonctionnelles de variants régulateurs dans des systèmes modèles de l’immunité et du cancer.

Bcl-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BCL6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Bcl-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BCL6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BCL6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Bcl-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BCL6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Bcl-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Bcl-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de BCL6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.