BCKDE1A Double Nickaseプラスミド (h): sc-417950-NIC

BCKDHA は、分岐鎖α-ケト酸デヒドロゲナーゼ（BCKDH）複合体の E1α サブユニットをコードしており、分岐鎖アミノ酸由来の α-ケト酸の酸化的脱炭酸反応を触媒するミトコンドリア酵素系の一部です。この活性は、バリン、ロイシン、イソロイシンの分解代謝の中核を成し、アミノ酸の回転をアセチル CoA およびスクシニル CoA の産生へと結び付けることで、ミトコンドリアのレドックスバランスやエネルギー代謝に影響します。BCKDHA の機能は、BCKDH 複合体のリン酸化動態およびミトコンドリア内補因子の利用可能性によって制御され、栄養状態のセンシングと代謝フラックスを統合します。BCKDHA の破綻は分岐鎖アミノ酸代謝の障害と関連し、メープルシロップ尿症などの先天代謝異常症にも関与するため、代謝ストレス、ミトコンドリア機能不全、アミノ酸駆動型シグナル伝達の研究において重要です。

BCKDE1A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BCKDHA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BCKDHA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BCKDHAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BCKDHAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。