Plasmide CRISPR d'Activation (h) Bax: sc-400042-ACT

Le gène humain **BAX** code Bax, un effecteur pro-apoptotique de la famille **BCL-2** qui contrôle la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale et la libération du cytochrome c, déclenchant l’activation des caspases et l’apoptose intrinsèque. L’activité de Bax est régulée par les protéines **BH3-only** et contrebalancée par les membres anti-apoptotiques de la famille BCL-2, intégrant des signaux de stress cellulaire tels que les dommages à l’ADN et la privation de facteurs de croissance. Cette voie s’articule avec les réponses au stress dépendantes de **p53**, la dynamique mitochondriale et la protéostasie pour orienter les décisions de destinée cellulaire. Une expression ou une signalisation de BAX dérégulée contribue à la modification des seuils d’apoptose observée en cancérologie, dans la neurodégénérescence et l’homéostasie immunitaire, faisant de BAX un nœud clé pour les études mécanistiques du contrôle de la mort cellulaire.

Bax Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BAX sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Bax Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BAX dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BAX, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Bax. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BAX natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Bax au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Bax dans les cellules tumorales présentant une expression de BAX silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.