Plásmido CRISPR de Activación (h) BAT1: sc-403785-ACT

DDX39B codifica BAT1, una helicasa de ARN dependiente de ATP de la familia DEAD-box que participa en el empalme del pre-ARNm, la exportación de ARNm y, de forma más amplia, en el metabolismo del ARN dentro del núcleo. BAT1 se ha relacionado con la regulación de la señalización inflamatoria mediante la modulación de la expresión de genes de citocinas y sus interacciones con vías de la inmunidad innata, lo que refleja su papel en la coordinación de las salidas transcripcionales con el procesamiento del ARN. Como gen localizado en la región de la clase III del MHC, DDX39B se ha estudiado en el contexto de la variación genética relacionada con el sistema inmune y la susceptibilidad a fenotipos inflamatorios y autoinmunes. La desregulación de las redes de procesamiento de ARN asociadas a BAT1 puede influir en programas del estado celular como la proliferación y las respuestas al estrés, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos del control de la expresión génica.

BAT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DDX39B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BAT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DDX39B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DDX39B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BAT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DDX39B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BAT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BAT1 en células tumorales con expresión de DDX39B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.