Bag-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402929

概要

BAG3は、共シャペロンであるBag-3をコードしています。Bag-3はストレス誘導性のタンパク質品質管理（protein quality control）の調節因子で、HSP70および低分子熱ショックタンパク質と協働し、シャペロン介在性選択的オートファジーとプロテオスタシスを協調的に制御します。Bag-3は、BCL2ファミリーの相互作用を調節することでアポトーシスや細胞生存シグナルに影響し、さらにオートファジー—リソソーム機能やユビキチン依存的分解などの経路を介して、細胞骨格ダイナミクスをストレス応答へと結び付けます。ヒト細胞では、BAG3の活性はミトコンドリアおよびサルコメアの完全性維持、ならびにタンパク質毒性、機械的、酸化的ストレスに対する応答の調節に関与するとされています。BAG3関連ネットワークの破綻は、心筋症、神経変性疾患の機序、がんに関連するストレス適応と結び付けられており、ストレス下での恒常性維持やリモデリングを研究する上で有用な結節点となります。

Bag-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBAG3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BAG3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BAG3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Bag-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Bag-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BAG3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Bag-3の機能に不可欠なBAG3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BAG3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Bag-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびBag-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BAG3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Bag-3 HDRプラスミド（h）および Bag-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBAG3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBAG3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。