Bag-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402929

Panoramica

BAG3 codifica il co-chaperone Bag-3, un regolatore inducibile dallo stress del controllo qualità delle proteine che coopera con HSP70 e con le piccole proteine heat shock per coordinare l’autofagia selettiva assistita da chaperoni e la proteostasi. Bag-3 influenza l’apoptosi e le vie di segnalazione della sopravvivenza cellulare modulando le interazioni della famiglia BCL2 e collegando la dinamica del citoscheletro alle risposte allo stress attraverso percorsi che includono la funzione autofagia–lisosoma e il turnover dipendente dall’ubiquitina. Nelle cellule umane, l’attività di BAG3 è implicata nel mantenimento dell’integrità mitocondriale e sarcomerica e nella regolazione delle risposte allo stress proteotossico, meccanico e ossidativo. La disregolazione delle reti associate a BAG3 è stata collegata alla cardiomiopatia, a meccanismi di malattie neurodegenerative e all’adattamento allo stress rilevante per il cancro, rendendolo un nodo utile per studiare l’omeostasi e il rimodellamento in condizioni di stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Bag-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BAG3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BAG3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BAG3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Bag-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BAG3 per lo studio della segnalazione di Bag-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BAG3 critici per la funzione di Bag-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BAG3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Bag-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Bag-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BAG3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Bag-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Bag-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BAG3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BAG3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.