Plásmido CRISPR de Activación (h) B7-2: sc-418032-ACT

El CD86 (B7-2) humano es una glicoproteína de membrana de tipo I expresada principalmente en células presentadoras de antígeno, donde proporciona señales coestimuladoras esenciales a las células T mediante la interacción con CD28 y CTLA-4. Al integrarse con la señalización del receptor de células T, B7-2 modula la activación linfocitaria, la producción de citocinas y la diferenciación, dando forma a las respuestas inmunitarias adaptativas y a la tolerancia periférica. CD86 participa en la formación de la sinapsis inmunológica y contribuye a programas transcripcionales vinculados a NF-κB y a PI3K/AKT que regulan los estados de activación tanto de los compartimentos inmunitarios innato como adaptativo. La expresión desregulada de CD86 se ha implicado en autoinmunidad, inflamación crónica, biología del rechazo de trasplantes y contextos de evasión inmunitaria tumoral, lo que lo convierte en una diana frecuente en inmunología y en investigaciones centradas en el microambiente.

B7-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD86 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

B7-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD86 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD86, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de B7-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD86 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de B7-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía B7-2 en células tumorales con expresión de CD86 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.