Particules Lentivirales d'Activation (h2) B-ATF: sc-401553-LAC-2

Le gène humain BATF code B-ATF, un facteur de transcription à fermeture éclair basique à leucines (bZIP) du réseau AP-1, qui s’hétérodimérise avec les protéines JUN et module la liaison à l’ADN sur des éléments de type AP-1 ainsi que sur des éléments composites AICE/IRF, afin de façonner des programmes d’expression génique spécifiques au contexte. BATF est un régulateur central de la différenciation et des fonctions effectrices des cellules immunitaires, influençant la spécification des lignages T auxiliaires et T auxiliaires folliculaires, les réponses des centres germinatifs et la signalisation induite par les cytokines en aval de voies telles que l’activation du TCR et le contrôle transcriptionnel dépendant d’IL-21/STAT. Une activité de BATF dérégulée, ainsi que les circuits transcriptionnels associés, a été reliée à l’inflammation d’origine immunitaire, à l’auto-immunité et à des états transcriptionnels oncogéniques dans les hémopathies malignes, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire. L’édition génomique de BATF soutient des applications de génomique fonctionnelle, notamment la perturbation de la coopération AP-1/IRF, la cartographie de l’utilisation des enhancers et du remodelage de la chromatine, ainsi que l’analyse des réseaux de signalisation immunitaire dans des modèles de cellules humaines modifiées.

Les particules d'activation lentivirales B-ATF (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de BATF dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales B-ATF (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription BATF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de B-ATF. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif BATF ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.