Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
AVP Receptor V1a Double Nickase Plasmid (h): sc-401691-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AVP Receptor V1a Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AVP Receptor V1a Double-Nickase-Plasmid (h) und AVP Receptor V1a Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AVPR1A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AVP Receptor V1a: sc-517313
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AVP Receptor V1a Double Nickase Plasmid (h) | sc-401691-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AVP Receptor V1a Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401691-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AVPR1A kodiert den humanen Arginin-Vasopressin-Rezeptor 1A (AVP-Rezeptor V1a), einen G‑Protein-gekoppelten Rezeptor, der überwiegend an Gq/11 koppelt und dadurch die Phospholipase Cβ aktiviert. Dies erhöht die intrazellulären Ca²⁺-Spiegel und Diacylglycerol und treibt so die Signalübertragung über die Proteinkinase C an. Der Rezeptor moduliert die Kontraktion der glatten Gefäßmuskulatur, die Thrombozytenfunktion, die hepatische Glykogenolyse und neuroendokrine Signalwege und integriert Vasopressinantworten in peripheren Geweben und im zentralen Nervensystem. AVPR1A-abhängige Signalwege überschneiden sich mit MAPK/ERK- und Immediate-Early-Gen-Programmen und verknüpfen die Rezeptoraktivierung mit kontextabhängigen transkriptionellen und zellulären Antworten. Eine fehlregulierte AVPR1A-Signalübertragung oder genetische Variation wurde im Zusammenhang mit kardiovaskulären und metabolischen Phänotypen sowie neurobehavioralen Merkmalen untersucht, was die Relevanz für mechanistische Studien vasopressin-reaktiver Signalwege unterstreicht.
AVP Receptor V1a Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AVPR1A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AVPR1A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AVPR1A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AVPR1A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.