Plasmide Double Nickase (h) AUP1: sc-410699-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AUP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AUP1 Double Nickase (h) et le plasmide AUP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AUP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) AUP1 | sc-410699-NIC | 20 µg | $410.00 |
AUP1 (ancient ubiquitous protein 1) est une protéine associée au réticulum endoplasmique, impliquée dans la biologie des gouttelettes lipidiques et le contrôle qualité des protéines. Elle participe à la dégradation associée au RE (ERAD) en reliant des substrats ubiquitinylés aux machineries de traitement en aval, influençant ainsi la protéostasie et les réponses cellulaires au stress. Par ses fonctions dans la signalisation de l’ubiquitine et le métabolisme des lipides, AUP1 contribue à des voies qui régissent l’homéostasie membranaire et l’adaptation métabolique. Le dérèglement de ces processus est pertinent dans des conditions caractérisées par une gestion altérée du stress du RE et du stockage lipidique, notamment la reprogrammation métabolique des cellules cancéreuses et des modèles de protéinopathies neurodégénératives.
AUP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AUP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AUP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AUP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AUP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.