ATP13A3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-413173

概要

ATP13A3は、陽イオン恒常性およびエンドリソソーム系における膜輸送に関与するとされるP5型ATPアーゼをコードしており、小胞輸送の制御や細胞内区画の完全性の維持に寄与します。イオン勾配やオルガネラ機能に影響を及ぼすことで、ATP13A3は細胞ストレス応答、代謝適応、ならびに膜動態に関連するシグナル伝達過程に影響し得ます。ATP13A3活性の変化は、心血管および肺血管の生物学と関連づけられており、肺動脈性肺高血圧症における遺伝学的関連が報告されていることから、血管リモデリングや内皮細胞機能の研究における重要性が示唆されます。さらに、その発現と細胞恒常性維持における推定される役割は、増殖・生存・輸送依存的シグナル伝達の機構解明にも有用です。

ATP13A3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるATP13A3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ATP13A3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ATP13A3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ATP13A3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ATP13A3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ATP13A3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ATP13A3の機能に不可欠なATP13A3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ATP13A3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ATP13A3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびATP13A3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ATP13A3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ATP13A3 HDRプラスミド（h）および ATP13A3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはATP13A3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のATP13A3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。