Particules Lentivirales d'Activation (h) ATP11B: sc-411692-LAC

ATP11B code une flippase de phospholipides de type P4‑ATPase qui contribue au maintien de l’asymétrie lipidique des membranes plasmique et des organites en transloquant des aminophospholipides à travers les bicouches de manière dépendante de l’ATP. En régulant la composition membranaire, ATP11B influence la formation de vésicules, le trafic endosomal et les processus de recyclage, qui recoupent le transport Golgi–endosome et, plus largement, la dynamique de la voie sécrétoire. La perturbation de l’asymétrie lipidique et du trafic peut affecter la signalisation, la polarité cellulaire et les réponses au stress, ce qui fait d’ATP11B un acteur pertinent pour l’étude de l’homéostasie membranaire et des phénotypes associés au transport. Des altérations de l’activité ou de l’expression d’ATP11B ont été examinées dans le contexte de comportements cellulaires liés aux maladies, tels que la gestion des médicaments, la survie en conditions de stress et des changements de la distribution intracellulaire des protéines membranaires.

Les particules d'activation lentivirales ATP11B (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ATP11B dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ATP11B (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ATP11B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ATP11B. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ATP11B ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.