Plasmide CRISPR d'Activation (h) ATIII: sc-403735-ACT

SERPINC1 code pour l’antithrombine III (ATIII), un inhibiteur de protéases à sérine d’origine hépatique qui neutralise des enzymes clés de la coagulation, notamment la thrombine et le facteur Xa, contribuant ainsi au maintien de l’équilibre hémostatique. L’activité de l’ATIII est potentialisée par le sulfate d’héparane et par les héparines utilisées en pharmacologie, ce qui relie SERPINC1 à une régulation de la cascade de coagulation dépendante des glycosaminoglycanes. Une expression ou une fonction altérée de SERPINC1 est associée à une génération de thrombine dérégulée et à une formation de fibrine perturbée, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes de thrombophilie et du contrôle des réseaux de coagulation. Dans les workflows de biologie cellulaire et de biologie des systèmes, SERPINC1 constitue un nœud expérimental exploitable pour explorer la dynamique protéase–inhibiteur, la communication endothélio–hépatique et les interfaces inflammation–coagulation.

ATIII Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SERPINC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ATIII Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SERPINC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SERPINC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ATIII. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SERPINC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ATIII au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ATIII dans les cellules tumorales présentant une expression de SERPINC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.