Plasmide Double Nickase (h) Atg4b: sc-404173-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Atg4b correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Atg4b Double Nickase (h) et le plasmide Atg4b Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATG4B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Atg4b Antibody (231CT21.1.7): sc-517310
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Atg4b | sc-404173-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Atg4b | sc-404173-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG4B code Atg4b, une protéase à cystéine qui traite les protéines de la famille ATG8, notamment LC3 et GABARAP, en les préparant à la lipidation et en les recyclant par délipidation au cours de la maturation des autophagosomes. Par ces étapes, Atg4b régule le flux autophagique, la mitophagie et l’élimination des protéines et organites endommagés, ce qui le relie à l’adaptation au stress cellulaire et à l’homéostasie métabolique. La modulation de la voie d’autophagie par ATG4B recoupe les voies de signalisation mTOR et AMPK et influence la présentation antigénique ainsi que les réponses immunitaires innées. Une activité d’ATG4B dérégulée et une dynamique d’autophagie altérée ont été associées à la biologie des cancers, à la neurodégénérescence et à des phénotypes inflammatoires, faisant d’ATG4B un nœud utile pour des études mécanistiques de la protéostasie.
Atg4b Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATG4B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATG4B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATG4B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATG4B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.