ATF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-400155-KO-2

概要

転写活性化因子4（ATF4）はbZIP型転写因子であり、統合ストレス応答（ISR）の中枢を担う。ATF4はeIF2αのリン酸化後に選択的に翻訳され、適応的な転写プログラムを統括する。ATF4はアミノ酸代謝、レドックス恒常性、オートファジー、ERストレスシグナル伝達を制御し、PERK–EIF2AK3、ATF3、CHOP/DDIT3とのクロストークを介して、生存とアポトーシスの転帰のバランス調整に関与する。栄養感知とプロテオスタシスの制御を通じて、ATF4はミトコンドリア機能や細胞分化プログラムにも影響を及ぼし、低酸素や酸化ストレス下での転写ネットワークの再編にも寄与する。ATF4活性の破綻は、がん細胞のストレス適応、神経変性に伴うプロテオトキシックストレス、代謝性疾患の表現型に関与することが示唆されており、ストレス応答性遺伝子ネットワークの機構研究における重要な結節点となっている。

ATF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるATF4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ATF4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ATF4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ATF4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ATF4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ATF4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ATF4の機能に不可欠なATF4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ATF4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ATF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびATF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ATF4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ATF4 HDRプラスミド（h）および ATF4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはATF4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のATF4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。