ATF-5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416821

概要

ATF5は、活性化転写因子5（ATF-5）をコードしており、これはbZIP型転写因子として、生存、プロテオスタシス（タンパク質恒常性）、分化に関与する遺伝子発現プログラムを制御することで、ストレスに対する細胞の適応を統合的に調整します。ATF-5の活性は、一般に統合的ストレス応答（ISR）シグナルと関連づけられており、eIF2α/ATF4依存性経路の下流における転写制御に結び付いています。また、ミトコンドリア機能やアポトーシスにおいては、状況依存的な役割を担うことが示されています。増殖中の細胞では、ATF-5が系譜状態の維持に関与し、不利な条件下での細胞周期や代謝の再編を支える可能性が指摘されています。ATF5の発現異常は、複数のがんモデルやその他のストレス関連病態で報告されており、ストレスシグナル伝達および転写ネットワークの機構研究における有用な解析ノードとなっています。

ATF-5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるATF5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ATF5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ATF5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ATF-5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ATF-5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ATF5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ATF-5の機能に不可欠なATF5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ATF5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ATF-5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびATF-5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ATF5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ATF-5 HDRプラスミド（h）および ATF-5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはATF5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のATF5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。