Plásmido CRISPR de Activación (h) ATAD5: sc-405654-ACT

El gen humano ATAD5 codifica una ATPasa AAA+ que regula la estabilidad del genoma al promover la descarga de PCNA de la cromatina durante la replicación y la reparación del ADN. A través de esta función, ATAD5 ayuda a coordinar la progresión de la horquilla de replicación, la reparación posreplicativa y la resolución del estrés replicativo, conectándose con vías que preservan la integridad del ADN durante la fase S. La alteración de la actividad de ATAD5 puede aumentar el daño al ADN asociado a la replicación y la inestabilidad cromosómica, procesos que se estudian con frecuencia en biología del cáncer y en otros trastornos vinculados a respuestas defectuosas al daño del ADN. Por ello, ATAD5 se utiliza ampliamente como punto de entrada mecanístico para estudiar la reparación acoplada a la replicación y la señalización de puntos de control en células de mamífero.

ATAD5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ATAD5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ATAD5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ATAD5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ATAD5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ATAD5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ATAD5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ATAD5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ATAD5 en células tumorales con expresión de ATAD5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.