ATAD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-413720

概要

ATAD1（ATPase family AAA domain containing 1）は、ミトコンドリア外膜に局在するAAA+ ATPaseであり、膜から誤って局在した、あるいは損傷したテールアンカー型タンパク質を引き抜いて除去することで、タンパク質品質管理に機能します。ATP依存的なディスロケース活性を介して、ATAD1はミトコンドリアの恒常性を維持し、ユビキチン–プロテアソーム系と協調するとともに、細胞代謝や生存に影響するオルガネラストレス応答にも関与します。ATAD1依存的な膜タンパク質監視機構が乱れると、ミトコンドリアのダイナミクスやプロテオスタシスが変化し得ます。これらの過程は、神経変性、代謝異常、がんに伴うミトコンドリアのリモデリングといった文脈で頻繁に研究されています。ミトコンドリアタンパク質のターンオーバー調節因子として、ATAD1は、オルガネラ品質管理がアポトーシスシグナルや細胞ストレス適応とどのように交差するかを検討するうえで有用な結節点となります。

ATAD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるATAD1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ATAD1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ATAD1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ATAD1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ATAD1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ATAD1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ATAD1の機能に不可欠なATAD1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ATAD1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ATAD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびATAD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ATAD1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ATAD1 HDRプラスミド（h）および ATAD1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはATAD1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のATAD1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。