Plásmido Doble Nickase (h) ASM: sc-401347-NIC

SMPD1 codifica la esfingomielinasa ácida (ASM), una hidrolasa lisosomal que convierte la esfingomielina en ceramida y fosfocolina, influyendo así en el recambio de esfingolípidos y en la composición lipídica de las membranas. La producción de ceramida dependiente de ASM contribuye al tráfico endolisosomal, a la función de la vía autofagia‑lisosoma, a la señalización sensible al estrés y a la organización de microdominios de membrana que modulan la señalización de receptores. La alteración de SMPD1 modifica el equilibrio esfingomielina/ceramida e impacta vías inflamatorias y apoptóticas vinculadas a la homeostasis celular. Los defectos genéticos en SMPD1 se asocian con una patología de almacenamiento lisosomal compatible con la enfermedad de Niemann–Pick tipos A/B, lo que convierte a SMPD1 en un objetivo ampliamente utilizado en estudios de biología lisosomal y metabolismo de esfingolípidos.

ASM El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SMPD1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SMPD1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SMPD1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SMPD1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.