Plasmide Double Nickase (h) ASIC2: sc-403265-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ASIC2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ASIC2 Double Nickase (h) et le plasmide ASIC2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ASIC2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ASIC2 | sc-403265-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ASIC2 | sc-403265-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ASIC2 (sous-unité 2 des canaux ioniques sensibles aux acides) code un canal cationique de la famille DEG/ENaC, activé par les protons et sensible à l’amiloride, qui contribue à l’excitabilité neuronale et à la dépolarisation membranaire en réponse à une acidification extracellulaire. Dans les cellules humaines, ASIC2 peut s’assembler avec d’autres sous-unités ASIC afin d’ajuster la sélectivité ionique, la cinétique de désensibilisation et la sensibilité au pH, reliant ainsi les variations locales de pH à l’entrée de Ca2+/Na+ et à la signalisation en aval. L’activité d’ASIC2 recoupe des processus tels que la transmission synaptique, la mécanoperception et la détection de microenvironnements inflammatoires où le pH extracellulaire fluctue. Des altérations de l’expression d’ASIC2 ou de la fonction du canal ont été étudiées en neurophysiologie et dans la signalisation liée à la douleur, et sont pertinentes pour la recherche sur les réponses neuronales au stress et les voies d’excitotoxicité.
ASIC2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ASIC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ASIC2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ASIC2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ASIC2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.