ASCL1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421562-ACT

Ascl1 kodiert den bHLH-Transkriptionsfaktor ASCL1 aus der Achaete-Scute-Familie der Maus, einen proneuralen Regulator, der die Festlegung auf neuronale Zelllinien und die Differenzierung vorantreibt. ASCL1 koordiniert Genexpressionsprogramme, die den Austritt aus dem Zellzyklus, die Reifung neuraler Vorläuferzellen und das Neuritenwachstum steuern, über bHLH/E-Box-abhängige transkriptionelle Netzwerke und Chromatin-Remodelling. In Entwicklungs- und Krankheitsmodellen wird eine veränderte ASCL1-Aktivität mit gestörter Neurogenese und Plastizität von Zelllinien in Verbindung gebracht, und ASCL1 wird häufig in Kontexten untersucht, in denen der Differenzierungszustand von Neuronen das zelluläre Verhalten beeinflusst. Diese Eigenschaften machen ASCL1 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung neuraler Entwicklungswege und transkriptioneller Schaltkreise in Maus-Systemen.

ASCL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ascl1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ASCL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ascl1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ascl1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ASCL1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ascl1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ASCL1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ASCL1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ascl1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.