Plasmide CRISPR d'Activation (h) ASC/TMS1/PYCARD: sc-400151-ACT

PYCARD code ASC (également connu sous le nom de TMS1), une protéine adaptatrice cytosolique qui initie l’assemblage de l’inflammasome et relie les récepteurs de reconnaissance des motifs situés en amont à l’activation des caspases inflammatoires. Via ses domaines PYD et CARD, ASC favorise la formation de « specks » d’ASC, facilitant l’activation de la caspase-1 et le traitement en aval de l’IL‑1β et de l’IL‑18, ainsi que la pyroptose dépendante de la gasdermine D. La signalisation dépendante d’ASC s’intègre aux voies de l’immunité innée, notamment les plateformes d’inflammasome NLRP3, AIM2 et apparentées, modulant la défense antimicrobienne et l’inflammation stérile. Une activité dérégulée de PYCARD/ASC a été impliquée dans des mécanismes de maladies inflammatoires et auto-immunes et est fréquemment étudiée dans des contextes d’infection, de neuroinflammation et de signalisation immunitaire associée aux tumeurs.

ASC/TMS1/PYCARD Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PYCARD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ASC/TMS1/PYCARD Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PYCARD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PYCARD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ASC/TMS1/PYCARD. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PYCARD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ASC/TMS1/PYCARD au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ASC/TMS1/PYCARD dans les cellules tumorales présentant une expression de PYCARD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.