ARK-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423193

Visão geral

Aurkc codifica a quinase Aurora C (ARK-3), uma quinase de serina/treonina que regula a dinâmica cromossómica e a divisão celular por meio da fosforilação de substratos mitóticos envolvidos na função do centrossoma, na montagem do fuso e na citocinese. Em células germinativas de rato, a atividade de AURKC é particularmente importante para a progressão meiótica e a segregação cromossómica correta, em interação com redes regulatórias mitóticas centrais que coordenam as ligações entre cinetócoro e microtúbulos e o checkpoint do fuso. A desregulação da sinalização das quinases Aurora está associada à aneuploidia e à instabilidade genómica, processos frequentemente estudados em biologia reprodutiva, genética do desenvolvimento e modelos do ciclo celular relevantes para o cancro. Assim, a perturbação de Aurkc oferece um ponto de entrada útil para dissecar mecanismos de má segregação cromossómica e controlo do ciclo celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ARK-3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Aurkc em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Aurkc, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Aurkc na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ARK-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Aurkc para a investigação da sinalização de ARK-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Aurkc críticos para a função ARK-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Aurkc para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ARK-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo ARK-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Aurkc. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ARK-3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR ARK-3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Aurkc para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Aurkc definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.