ARK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401568

概要

AURKAはARK-1をコードするセリン／スレオニンキナーゼであり、中心体および有糸分裂紡錘体の極に局在して、中心体成熟、紡錘体形成、ならびに正確な染色体分配を協調的に制御します。ARK-1の活性はG2/M移行期を通じて厳密に調節されており、PLK1依存性およびTPX2依存性の過程を含む有糸分裂の中核制御回路と連動することで、適切なタイミングでの有糸分裂への進入と進行を保証します。AURKAシグナル伝達の破綻は、異常な紡錘体ダイナミクス、異数性、染色体不安定性と関連しており、細胞周期制御、ゲノム維持、腫瘍化に関する研究において広く重要です。ヒト細胞では、ARK-1機能の撹乱が、チェックポイント応答、有糸分裂タイミング、中心体駆動性ストレス経路の解析にしばしば利用されます。

ARK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAURKA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AURKA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AURKAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ARK-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ARK-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AURKA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ARK-1の機能に不可欠なAURKAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AURKAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ARK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびARK-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AURKA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ARK-1 HDRプラスミド（h）および ARK-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAURKAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAURKA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。