ARH1 Double Nickase Plasmid (m): sc-419017-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ARH1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ARH1 Double-Nickase-Plasmid (m) und ARH1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Adprh abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ARH1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419017-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen *Adprh* kodiert ARH1, eine ADP-Ribosylakzeptor-Hydrolase, die die Mono-ADP-Ribosylierung an Argininresten rückgängig macht und damit den Umsatz von ADP-Ribose-Markierungen auf Proteinen reguliert. Durch die Kontrolle dieser posttranslationalen Modifikation trägt ARH1 zu NAD⁺-abhängiger Signalübertragung und zu umfassenderen ADP-Ribosylierungsdynamiken bei, die mit zellulären Stressantworten, dem Stoffwechsel und der Proteinfunktion verknüpft sind. Störungen der argininverknüpften ADP-Ribosylierung wurden mit fehlregulierten Signalnetzwerken und veränderter zellulärer Homöostase in Zusammenhang gebracht, wodurch *Adprh* ein nützlicher Genlokus für mechanistische Studien zur ADP-Ribose-Biologie ist. In Mausmodellen hilft die Manipulation der ARH1-Aktivität zu untersuchen, wie reversible ADP-Ribosylierung die Gewebephysiologie und krankheitsrelevante Phänotypen prägt, ohne dabei therapeutische Wirkungen zu implizieren.
ARH1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Adprh-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Adprh abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Adprh-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Adprh-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.