ARH1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419017

Panoramica

Adprh codifica ARH1 (idrolasi 1 dell’ADP-ribosilarginina), un enzima citosolico che idrolizza il mono-ADP-ribosio legato all’arginina dalle proteine e contribuisce a mantenere l’omeostasi dell’ADP-ribosilazione. Invertendo la mono-ADP-ribosilazione, ARH1 influenza la segnalazione in risposta allo stress e al danno al DNA, le vie dell’immunità innata e la regolazione della funzione proteica tramite il turnover delle modifiche post-traduzionali. L’alterazione del metabolismo dell’ADP-ribosio è stata associata a risposte infiammatorie modificate, difetti nel mantenimento del genoma e deregolazione dei programmi di sopravvivenza cellulare. Nei modelli murini, Adprh rappresenta un punto di accesso sperimentalmente gestibile per studiare come l’ADP-ribosilazione reversibile dell’arginina modelli la resilienza cellulare e fenotipi rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ARH1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adprh in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adprh insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adprh a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ARH1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adprh per lo studio della segnalazione di ARH1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adprh critici per la funzione di ARH1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adprh per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ARH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ARH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adprh. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ARH1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ARH1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adprh per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adprh definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.