ARF5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419190

概要

Arf5 は、ADP リボシル化因子 5（ARF5）をコードしており、GDP 結合型と GTP 結合型の間をサイクルする小型 GTPase として、膜輸送およびオルガネラ動態を制御します。ARF5 は、ゴルジ体およびエンドソーム膜における小胞出芽とカーゴ選別を協調し、ARF エフェクター経路を介して COPI 依存性輸送、リン脂質リモデリング、アクチン関連プロセスに寄与します。分泌およびエンドサイトーシスのフラックスを形作ることで、ARF5 は受容体リサイクリング、細胞内シグナル伝達の区画化、細胞ストレス応答に影響します。ARF ファミリー GTPase の回路や小胞輸送プログラムの破綻は、異常な増殖・遊走や神経発生の表現型との関連でしばしば研究されており、Arf5 は機序解明型の疾患モデルにおいて関連性の高い標的となります。

ARF5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるArf5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Arf5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Arf5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ARF5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ARF5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Arf5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ARF5の機能に不可欠なArf5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Arf5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ARF5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびARF5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Arf5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ARF5 HDRプラスミド（m）および ARF5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはArf5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のArf5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。