Aquaporin 8/AQP8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419179

概要

Aqp8はアクアポリン8（AQP8）をコードしており、AQP8は水の迅速な移動を促進する膜チャネルである。さらに細胞種によっては、過酸化水素などの小さな中性溶質の膜貫通輸送にも寄与しうる。マウス組織では、AQP8の発現は上皮における体液の取り扱いおよび分泌生理と関連しており、細胞内局在は形質膜と細胞内膜の両方で報告されていることから、浸透圧バランスやオルガネラの恒常性における役割が支持される。水透過性および酸化還元に関連する溶質フラックスに影響することで、AQP8は上皮バリア機能、ミトコンドリア生理、酸化ストレスシグナル伝達などの過程と交差する。AQP8の活性または発現の破綻は、炎症性および代謝性の表現型、肝臓および消化管の生理、ならびに疾患機序に関連する細胞の酸化還元恒常性の広範な乱れとの文脈で検討されている。

Aquaporin 8/AQP8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAqp8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aqp8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aqp8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Aquaporin 8/AQP8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Aquaporin 8/AQP8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aqp8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Aquaporin 8/AQP8の機能に不可欠なAqp8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aqp8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Aquaporin 8/AQP8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAquaporin 8/AQP8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aqp8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Aquaporin 8/AQP8 HDRプラスミド（m）および Aquaporin 8/AQP8 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAqp8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAqp8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。