Plasmide CRISPR d'Activation (h) Aquaporin 8/AQP8: sc-402490-ACT

AQP8 code l’aquaporine 8, un canal membranaire qui facilite le transport rapide de l’eau et permet également le passage de petits solutés tels que le peroxyde d’hydrogène, reliant la perméabilité membranaire à l’équilibre osmotique et à la signalisation redox. AQP8 est exprimée dans des contextes épithéliaux et liés au système immunitaire, où elle soutient le mouvement des fluides, l’homéostasie des organites et un flux régulé d’espèces réactives de l’oxygène pouvant influencer des voies contrôlant la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. Une expression altérée d’AQP8 a été rapportée dans des états inflammatoires et dans de nombreux types de cancers, où un transport dérégulé de l’eau et du H2O2 peut remodeler la migration cellulaire, la fonction barrière et la dynamique des signaux. Par conséquent, AQP8 est couramment étudiée dans des modèles de physiologie épithéliale, de biologie du stress oxydatif et de comportement des cellules tumorales.

Aquaporin 8/AQP8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AQP8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Aquaporin 8/AQP8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AQP8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AQP8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Aquaporin 8/AQP8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AQP8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Aquaporin 8/AQP8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Aquaporin 8/AQP8 dans les cellules tumorales présentant une expression de AQP8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.