APRT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419171

概要

マウスのAprtは、アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（APRT）をコードしており、ホスホリボシルピロリン酸（PRPP）を用いてアデニンをAMPへ変換する、プリン回収経路における細胞質の主要酵素である。プリン塩基を再利用することで、APRTはヌクレオチドプールの恒常性、DNA/RNA合成、ならびに細胞エネルギー代謝を維持し、とりわけde novoプリン合成が制限される条件下で重要となる。APRTが破綻するとプリン恒常性が乱れ、アデニン由来代謝産物の蓄積が促進され得ることから、APRT活性は代謝ストレス応答とも関連づけられる。したがってAprtは、ヌクレオチド代謝とゲノム維持、酸化ストレス、組織特異的な代謝不均衡への感受性を結びつける機構の研究に有用である。

APRT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAprt遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aprt内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aprtのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、APRTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、APRTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aprt欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• APRTの機能に不可欠なAprtエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aprtゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• APRT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAPRT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aprt遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  APRT HDRプラスミド（m）および APRT HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAprtホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAprt標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。