Plásmido CRISPR de Activación (h) apolipoprotein E/apoE: sc-400860-ACT

APOE codifica la apolipoproteína E (apoE), una proteína secretada de unión a lípidos que media el transporte de colesterol y triglicéridos mediante interacciones con miembros de la familia del receptor de LDL y con proteoglucanos de heparán sulfato. La apoE es fundamental para el ensamblaje y la depuración de partículas de lipoproteínas e influye en la captación, redistribución y señalización homeostática de lípidos en hepatocitos, macrófagos y células gliales. En el sistema nervioso, la apoE modula el mantenimiento sináptico, las respuestas neuroinflamatorias y las vías de proteostasis que afectan el manejo del beta-amiloide (amiloide-β). Las diferencias genéticas y de expresión en APOE se asocian fuertemente con la dislipidemia y la neurodegeneración, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos del metabolismo lipídico y del crosstalk inmunitario–lipídico en el cerebro.

apolipoprotein E/apoE El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de APOE sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

apolipoprotein E/apoE El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus APOE en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional APOE, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de apolipoprotein E/apoE. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo APOE y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de apolipoprotein E/apoE en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía apolipoprotein E/apoE en células tumorales con expresión de APOE silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.