apoB CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-433607

概要

マウスApobは、アポリポタンパク質B（apoB）をコードしている。apoBは、カイロミクロンやVLDLなどのトリグリセリドに富むリポタンパク質の組み立てと分泌、ならびにその後のLDL形成に必須の構造アポリポタンパク質である。apoBは、小胞体においてミクロソームトリグリセリド転送タンパク質（MTP）との相互作用を介してリポタンパク質の生合成を統括し、肝臓および腸管での脂質処理を全身のコレステロール輸送と結び付けている。粒子数と組成を規定することで、apoBはリポタンパク質受容体との結合、脂質取り込み、ならびに下流の代謝シグナル伝達に影響を与える。APOB依存経路の制御異常は、マウスにおける高脂血症、脂肪肝表現型、ならびに動脈硬化に関連する脂質輸送をモデル化する際に広く利用されている。

apoB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるApob遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Apob内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Apobのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、apoBタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、apoBシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Apob欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• apoBの機能に不可欠なApobエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Apobゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• apoB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびapoB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Apob遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  apoB HDRプラスミド（m）および apoB HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはApobホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のApob標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。