Plásmido CRISPR de Activación (h) apoB: sc-400705-ACT

El gen humano **APOB** codifica la apolipoproteína B (apoB), un componente estructural esencial de las lipoproteínas aterogénicas que actúa como andamiaje para el ensamblaje de las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) en los hepatocitos y favorece su conversión a lipoproteínas de baja densidad (LDL) en la circulación. La apoB participa en el transporte de lípidos y la homeostasis del colesterol mediante vías que regulan la biogénesis, la secreción y la captación mediada por receptores de las lipoproteínas, integrándose con el procesamiento en el retículo endoplásmico y el metabolismo de partículas ricas en triglicéridos. La desregulación de la expresión de **APOB** o de la producción de partículas que contienen apoB se asocia fuertemente con estados hiperlipidémicos y con la biología de la enfermedad cardiovascular, y también es relevante para el manejo hepático de lípidos y mecanismos vinculados a la esteatosis. Por ello, **APOB** se utiliza ampliamente para modelar el metabolismo de las lipoproteínas, la dinámica de las partículas de apoB y las respuestas inflamatorias y vasculares posteriores en sistemas de investigación.

apoB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de APOB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

apoB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus APOB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional APOB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de apoB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo APOB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de apoB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía apoB en células tumorales con expresión de APOB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.