API5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406608

概要

API5（apoptosis inhibitor 5）は、アポトーシスシグナルの調節や細胞のストレス耐性の支持を通じて細胞生存に寄与する核内タンパク質をコードします。API5は、E2F依存的な転写プログラムの制御、細胞周期の進行、増殖能の維持に関与するとされ、クロマチン関連プロセスに影響する相互作用も報告されています。API5の発現変化は、アポトーシス抵抗性の増強や増殖制御の変化など、腫瘍形成に関連する表現型の文脈でしばしば研究されています。そのため、API5は、生存シグナル、転写制御、ならびに腫瘍関連の細胞状態転換の機構を解明するうえで有用な標的です。

API5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAPI5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、API5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、API5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、API5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、API5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、API5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• API5の機能に不可欠なAPI5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、API5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• API5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAPI5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、API5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  API5 HDRプラスミド（h）および API5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAPI5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAPI5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。