Apg-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403942-ACT

HSPA4Lは、ATP依存性分子シャペロンであるHSP70ファミリーの一員Apg-1をコードしており、クライアントタンパク質のフォールディング促進、凝集の抑制、細胞ストレスからの回復の補助を通じて、プロテオスタシスの維持に寄与する。Apg-1は細胞保護的な熱ショック応答に関与するとともに、ユビキチン‐プロテアソーム系による分解回転やオートファジーに結びついた品質管理経路の協調にも関与し、酸化ストレス、熱ストレス、ERストレス下でのタンパク質恒常性を支える。プロテオスタシスの破綻はがん、神経変性疾患などストレス関連病態に共通する特徴であるため、シャペロン機能の余力、タンパク質ミスフォールディング、ストレス適応が細胞運命の決定に影響する状況において、HSPA4L活性の変化が研究対象となっている。ヒトApg-1はまた、ストレス感知をアポトーシス、細胞周期制御、代謝リモデリングへと結び付けるシグナル伝達ノードとHSP70ネットワークとのクロストークを解析するうえで、有用なモデルにもなる。

Apg-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HSPA4Lの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Apg-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HSPA4L 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHSPA4L転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Apg-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHSPA4L遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるApg-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHSPA4L発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるApg-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。