AP-3β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419135

概要

Ap3b1 は、マウスの AP-3 β サブユニットをコードしており、カーゴのソーティングモチーフを認識し、エンドソームおよびトランスゴルジネットワークからリソソームやリソソーム関連オルガネラへの小胞輸送を制御するアダプタータンパク質3（AP-3）複合体の中核構成要素です。AP-3 依存的な輸送は、膜タンパク質の輸送、オルガネラ形成、調節性分泌経路を支え、神経細胞および免疫細胞の生理機能にとって重要です。AP-3 複合体機能の破綻は、シナプス小胞タンパク質のソーティング異常やエンドリソソーム恒常性の変化と関連づけられており、AP-3 経路の攪乱で観察される神経発達および免疫学的表現型とを結び付ける機序的なつながりを示しています。

AP-3β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAp3b1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ap3b1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ap3b1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AP-3βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AP-3βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ap3b1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AP-3βの機能に不可欠なAp3b1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ap3b1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AP-3β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAP-3β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ap3b1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AP-3β HDRプラスミド（m）および AP-3β HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAp3b1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAp3b1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。