Plásmido Doble Nickase (h) AP-1μ2: sc-404512-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)AP-1μ2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa AP-1μ2 (h) y el plásmido de doble nickasa AP-1μ2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a AP1M2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) AP-1μ2 | sc-404512-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) AP-1μ2 | sc-404512-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AP1M2 codifica la subunidad μ2 del complejo adaptador de proteínas 1 (AP-1), un componente central en la formación de vesículas recubiertas de clatrina en la red trans-Golgi y en los endosomas. AP-1μ2 contribuye a la selección de la carga al reconocer motivos de clasificación en las colas citosólicas de proteínas transmembrana, ayudando a dirigir receptores y enzimas a través de la red de tráfico secretor y endolisosomal. A través de estas funciones, AP-1μ2 mantiene la homeostasis de proteínas de membrana, el reciclaje de receptores y los procesos de tráfico polarizado que determinan la salida de señalización y la composición de los orgánulos. La alteración de la clasificación mediada por complejos adaptadores es ampliamente relevante para estudios de neurodesarrollo, señalización inmunitaria y biología del cáncer, donde los cambios en el tráfico vesicular pueden influir en la abundancia de receptores de factores de crecimiento y en la activación de vías posteriores.
AP-1μ2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AP1M2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AP1M2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AP1M2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AP1M2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.