ANP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400723

概要

NPPAは、心臓由来ホルモンである心房性ナトリウム利尿ペプチド（ANP）をコードしており、ナトリウム利尿ペプチド受容体および下流のcGMP/PKGシグナル伝達を介して、血液量と血管トーンを調節します。ANPはナトリウム利尿、利尿、血管拡張を促進し、レニン–アンジオテンシン–アルドステロン系の活性も調節することで、心筋の伸展（ストレッチ）感知を全身の体液・電解質恒常性に結び付けます。NPPAの発現は心筋細胞で厳密に制御されており、心臓ストレスに伴うリモデリング時に動的に誘導されます。NPPA/ANPシグナルの破綻は、高血圧、心肥大、心不全などを含む心血管病態と関連しており、心代謝および血行動態の調節機構を解明するための重要な研究ノードとなっています。

ANP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNPPA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NPPA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NPPAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ANPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ANPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NPPA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ANPの機能に不可欠なNPPAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NPPAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ANP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびANP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NPPA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ANP HDRプラスミド（h）および ANP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNPPAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNPPA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。