Plasmide Double Nickase (h) Ankyrin G: sc-400421-NIC

ANK3 code l’ankyrine G, une protéine adaptatrice membranaire qui relie divers canaux ioniques et molécules d’adhérence cellulaire au cytosquelette spectrine–actine, organisant des domaines membranaires spécialisés tels que le segment initial de l’axone et les nœuds de Ranvier. En régulant le regroupement des canaux et l’assemblage de complexes d’échafaudage au niveau des membranes excitables, l’ankyrine G influence la polarité neuronale, l’initiation du potentiel d’action et la stabilité synaptique, et elle contribue également à l’intégrité des jonctions intercellulaires épithéliales. Des perturbations associées à ANK3 ont été reliées à la génétique des maladies neuropsychiatriques et à une altération du fonctionnement des réseaux neuronaux, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans les études portant sur l’excitabilité, le développement des circuits et l’organisation du cytosquelette. Ces propriétés font d’ANK3 une cible pertinente pour disséquer les voies qui gouvernent le trafic des protéines membranaires, l’ancrage au cytosquelette et la signalisation cellulaire au sein de compartiments subcellulaires spécialisés.

Ankyrin G Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ANK3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ANK3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ANK3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ANK3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.