Ankyrin G CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400421-ACT

ヒトのANK3はアンキリンGをコードしており、膜貫通タンパク質をスペクトリン‐アクチン細胞骨格に連結する多機能アダプターとして働き、特化した膜ドメインを組織化するとともに、タンパク質複合体を安定化します。アンキリンGは、軸索起始部（AIS）やランヴィエ絞輪において電位依存性ナトリウムチャネルなどの構成要素を集積させる役割を通じて、神経細胞の極性と興奮性に不可欠であり、さらに上皮における膜構造の組織化にも寄与します。これらの足場（スキャフォールド）機能により、アンキリンGは細胞骨格のリモデリング、膜輸送、そして細胞の構造と情報伝達を協調させるシグナル伝達経路に影響を与えます。遺伝学的研究および発現解析によりANK3の制御異常が神経精神疾患や神経発達関連の表現型と関連づけられており、神経回路の機構研究や膜ドメイン生物学における重要性が示されています。

Ankyrin G CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANK3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ankyrin G CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANK3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANK3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ankyrin Gの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANK3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAnkyrin G依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANK3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAnkyrin G経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。